Серологические исследования — это методы изучения антигенов или антител в биологическом материале больных, основанные на определенных реакциях иммунитета. Обнаружение в биологическом материале антител к возбудителю инфекции или антигенов позволяет установить причину заболевания.
Серологические исследования не обладают 100% специфичностью и чувствительностью при диагностике инфекционных заболеваний.
Поэтому оценивать их результаты нужно с учетом клинической картины заболевания.
Этим обусловлена необходимость использования для диагностики инфекции нескольких тестов, а также применение методов Western-blot, подтверждающих результаты скрининговых методов.
«Иммуноблоттинг (Вестерн-блот, Western-blot) является фактически конечным верификационным (подтверждающим) методом в цепи иммунологических исследований, которые позволяют сделать окончательное лабораторное заключение. Особенно важный данный тест для подтверждения или опровержения инфекционного заболевания (например, коклющ, боррелиоз и т.д.).
Метод Вестрен-блота, как правило, необходим после обнаружения положительных антител класса IgG инфекционного процесса, т.к. именно в такой комбинации происходит более правильная лабораторная интерпретация результатов и дальнейшая тактика лечения пациента.
Для постановки Вестерн-блота используют специальные нитроцеллюлозные полоски, на которые методом горизонтального и затем вертикального иммунофореза перенесены белки в порядке нарастания молекулярного веса.
Антитела сыворотки пациента взаимодействует с белками в определенных зонах полоски, а дальше происходит ход реакции аналогичный иммуноферметному анализу (ИФА)»,- объясняет к.мед.наук, медицинский директор лаборатории СИНЭВО Украина, Оксана Владиславовна Небыльцова.
Биологический материал, используемый для серологического исследования
- Сыворотка крови
- Слюна
- Фекальные массы
Для диагностики каких состояний используются серологические исследования
Целью серологических исследований является установление эффективности проведенного лечения после выздоровления пациента, а также обнаружение рецидива заболевания. Кроме того, серологические методы могут выявить такие заболевания как:
- Амебиаз
- Лямблиоз
- Описторхоз
- Трихинеллёз
- Токсоплазмоз
- Токсокароз
- Цистицеркоз
- Эхинококкоз
- ЗППП
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ, метод Кунса)
Прямой: микробы или антигены тканей или микробы обрабатваются специальными сыворотками с антителами, а также меченными флюорохромами, которые светятся в УФ-лучах. Бактерии, таким образом, светятся в виде каймы зеленого цвета по периферии клетки. Наблюдается в люминисцентном микроскопе.
Непрямой: мазки обрабатываются антителами антимикробной кроличьей сыворотки. Затем антитела, которые не связались с антигенами микробов, отмываются. Таким образом, выявляются оставшиеся на микробах антитела. В итоге, образуется комплекс микроб + антикроличьи антитела + антимикробные кроличьи антитела, помеченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдается в люминесцентном микроскопе.
Для оценки результатов существует четырёхбалльная шкала, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:
- + очень слабое свечение клетки
- ++ слабое свечение периферии клетки
- +++/++++ яркое свечение клетки
Титром реакции считается разведение сыворотки с результатом результат реакции +++ или ++++.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГ)
Реакция пассивной или непрямой гемагглютинации используется при диагностике инфекций, вызванных простейшими, бактериями и риккетсиями.
Методика состоит из нескольких этапов. Сначала эритроциты обрабатываются «отмываются» изотоническим раствором хлорида натрия, после, при необходимости, — раствором танина 1: 20000, далее сенсибилизируются растворимыми антигенами.
После обработки буферным изотоническим раствором хлорида натрия, антиген готов к употреблению.
Сыворотку разводят в пробирках изотоническим раствором хлорида натрия, после чего к каждой разведенной сыворотке добавляют эритроцитарный диагностикум.
Результаты оценивают по характеру осадка эритроцитов:
- + слабая интенсивность
- ++ средняя интенсивность
- +++ интенсивная реакция
- ++++ резко интенсивная реакция
Положительным считается результат реакции с интенсивной реакцией +++ или резко интенсивной реакцией ++++, при которых эритроциты покрывают все дно пробирки.
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Метод обладает высокой специфичностью и чувствительностью, более 90%. Основное достоинство — возможность выявления инфекции и прослеживания динамики процесса, на который указывает уровень антител.
Применяется анализ для диагностики широкого круга инфекций, в том числе:
- ВИЧ-инфекция
- Вирусные гепатиты
- ЗППП
- Цитомегаловирусная инфекция
- Герпесная инфекция
- Токсоплазменная инфекция
Антиген или антитело фиксируется на твёрдых планшетах, затем, с помощью ферментной метки выявляются комплексы антиген – антитело.
ИФА имеет ряд преимуществ перед остальными серологическими методами. Реакция наиболее чувствительная, а в тестах используются универсальные реагенты. Анализ отличается быстротой, возможностью исследования иммуноглобулинов различных классов. В настоящее время ИФА является одним из основных методов лабораторной диагностики.
Оценка результатов ИФА проводится автоматически с помощью специальных приборов. В некоторых случаях также допускается и визуальный учёт результатов реакции. Достоверность серологической диагностики зависит от организации лабораторного контроля, состоящего из нескольких процедур, предназначенных для оценки качества результатов.
Источник: http://www.likar.info/metodyi-diagnostiki/article-59466-serologicheskie-issledovaniya/
